Без кейворда
JIS K 0350-60-10には，次に示す附属書がある。
Testing method for detection and enumeration of sulfate - reducing bacteria
in industrial water
1. 適用範囲 この規格は，工業用水中の硫酸塩還元菌を培養法によって定性的，定量的に判定する試験
2. 引用規格 付表1に示す規格は，この規格に引用されることによって，この規格の規定の一部を構成
3. 定義 この規格で用いる主な用語の定義は，JIS K 0101，JIS K 0102，JIS K 0550及びJIS K 0211に
4. 共通事項 共通事項は，次による。
通則 化学分析に共通する一般事項は，JIS K 0050による。
水 JIS K 0557に規定するA2又はA3(1)の水。
a) 試薬は， JISに規定されているものの最上級の品質のものを用い，JISに規定されているものがない
ガラス器具類 ガラス器具類は，一般にJIS R 3503及びJIS R 3505に規定するものを使用する。た
操作を伴う場合には，JIS R 3503に規定するほうけい酸ガラス-1を用いる。
a) 乾熱滅菌 ガラス製，金属製器具類などの滅菌に用いる。滅菌する器具類は，硫酸紙，アルミニウム
b) 高圧蒸気滅菌 培地，希釈水，試料容器，使用済み培地などの滅菌に用いる。また，比較的構造の複
おく。滅菌時間は高圧蒸気滅菌器の内部の温度が121 ℃に到達した後，15〜20 分間とする。
c) 火炎滅菌 移植操作時の試験管の口部などの滅菌に用いる。試料採取時の給水栓などの滅菌にも用い
a) 試験操作の前後には，手指及び実験台を消毒する。手指の消毒にはクレゾール石けん液(10 g/L)，陽性
石けん液(1〜10 g/L)，消毒用エタノール(日本薬局方に規定するもの)又はエタノール[80 ％(体積分率)]
［JIS K 8102に規定するエタノール(95)を用いて調製する。］を用いる。
実験台は，陽性石けん液(10 g/L)，消毒用エタノール，エタノール[80 ％(体積分率)]などを噴霧する
b) 使用済みのピペット，試料容器，採水器などの器具は，クレゾール石けん液(30〜50 g/L)などの消毒液
a) 試料容器 共栓ガラス瓶100〜1 000 ml。試料容器は，あらかじめ水で洗浄，乾燥した後，栓部と首部
注(2) 残留塩素などの酸化性物質を含む試料を採取する場合には，試料容器にJIS K 8637に規定する
b) 採水器 ハイロート採水器。採水器は，携帯箱に収めて乾熱滅菌を行う。図 1に一例を示す。
A：ガラス瓶(100〜1 000 ml)
図 1 ハイロート採水器及び携帯箱の一例
a) 表層水の採取 湖沼，河川，水路，貯水槽などの表層水で，直接採取できる場合は，試料容器で試料
b) 各深度の水の採取 一定の深さの水は，採水器を用いて採取する(3)。
c) 給水栓からの採取 給水栓の材質が火炎滅菌に耐えるものである場合は，あらかじめ，火炎滅菌に準
d) 配管，装置からの採取 c)と同様に操作して採取する。
試料の取扱い 試験は試料採取後，直ちに行う。直ちに試験ができない場合には，0〜5 ℃(凍結さ
6. 試験方法 試験方法は，試料中の硫酸塩還元菌の発育に伴って産生された硫化水素が，改良ISA液体
b) 希釈水 希釈水は，生理食塩水又はりん酸塩希釈水(pH7.2)を用いる。
1) 生理食塩水 JIS K 8150に規定する塩化ナトリウム8.5 gを水に溶かして1 Lとする。これを6.2 d)
2) りん酸塩希釈水(pH7.2) JIS K 9007に規定するりん酸二水素カリウム34 gを水約500 mlに溶かし，
これに水酸化ナトリウム溶液(1 mol/L)(JIS K 8576に規定する水酸化ナトリウムを用いて調製する。)
を滴加してpHを7.2に調節し，JIS K 0557に規定する炭酸を含まない水を加えて全量を1 Lとする。
この溶液1.25 mlをとり，水を加えて1 Lとする。これを1)と同じ滅菌操作を行う。
c) 改良ISA液体培地 トリプトン10 g，乳酸ナトリウム[70 %(質量分率)]5 g，JIS K 8061に規定する亜
硫酸ナトリウム0.5 g，くえん酸鉄(Ⅲ)アンモニウム0.5 g，JIS K 8995に規定する硫酸マグネシウム七
水和物2.0 g及びJIS K 8978に規定する硫酸鉄(Ⅱ)七水和物0.5 gを水1 Lに加え，かき混ぜて溶かす。
滅菌後のpHが7.3±0.1となるように，水酸化ナトリウム溶液(1 mol/L)又は塩酸(1 mol/L)(JIS K 8180
この溶液10 mlをねじ口試験管(25 ml)にとり，高圧蒸気滅菌を約20 分間行って滅菌する。この培
d) 2倍濃度改良ISA液体培地 改良ISA液体培地の調製で用いた各試薬の2倍量を水1 Lに加え，かき
混ぜて溶かす。滅菌後のpHが7.3±0.1となるように，水酸化ナトリウム溶液(1 mol/L)又は塩酸(1 mol/L)
この溶液10 mlをねじ口試験管(25 ml)にとり，高圧蒸気滅菌を約20 分間行って滅菌する。この培
e) 3倍濃度改良ISA液体培地 改良ISA液体培地の調製で用いた各試薬の3倍量を水1 Lに加え，かき
混ぜて溶かす。滅菌後のpHが7.3±0.1となるように，水酸化ナトリウム溶液(1 mol/L)又は塩酸(1 mol/L)
この溶液25 mlをねじ口試験管(100 ml)にとり，高圧蒸気滅菌を約20 分間行って滅菌する。この培
a) メスピペット 1〜10 ml。ピペット滅菌箱に先端を先にして入れるか，アルミニウムはく又は硫酸紙
b) 駒込ピペット 1〜10 ml。ピペット滅菌箱に先端を先にして入れるか，アルミニウムはく又は硫酸紙
c) ねじ口試験管 容量25〜100 ml。本体はほうけい酸ガラス製，ねじぶたは耐熱樹脂製又は金属製，内
d) 希釈瓶 ガラス瓶又は三角フラスコ(4)で，金属製又は合成樹脂製のねじぶた(5)付きのもの。使用前に
e) 培養器 JIS T 1702に規定するふ(孵)卵器。20〜35 ℃の間で設定温度±1℃に調節できるもの。
一般事項 3倍濃度の改良ISA液体培地に試料の一定量を加えて，30±1 ℃で2〜3 日間培養し，
a) 3倍濃度改良ISA液体培地入りねじ口試験管(100 ml)1本に，よくかき混ぜて均一にした5.の試料50 ml
注(6) 改良ISA液体培地に代えて，流動パラフィン(JIS K 9003に規定する流動パラフィンを，使用時
b) これを培養器に入れ，30±1 ℃で2〜3 日間培養する。
定量試験 改良ISA液体培地を入れたねじ口試験管に試料の一定量を加えて，30±1 ℃で4〜5 日
a) よく振り混ぜて均一にした5.の試料(10)1 mlをメスピペット1 mlでとり，希釈水9 mlを入れた希釈瓶
注(10) 試料が酸性，又はアルカリ性の場合には，水酸化ナトリウム溶液(1 mol/L)又は塩酸(1 mol/L)を
b) この1 mlを別のメスピペット1 mlでとり，希釈水9 mlを入れた別の希釈瓶に加えてよく振り混ぜる。
a) 試料(10)10 ml，1 ml，0.1 ml(11)，0.01 ml(11)のように連続した4段階の試料(12)それぞれ5本ずつ(5-5-5
注(11) 試料の量が0.1 mlの場合は，希釈水で10倍に薄めた試料1 mlを，また，試料の量が0.01 mlの
(13) 試料10 mlを培養する場合に用いる。
b) これを培養器に入れ，30±1 ℃で4〜5日間培養する。
d) これから最確数表(表1)を用いて試料100 ml中の最確数(15)を求める。
注(15) 表1の最確数表は，薄めない試料10 ml，1 ml，0.1 mlずつを培養したときの試料100 ml当たり
表 1 最確数表(5-5-5法，10 ml，1.0 ml，0.1 ml)
1(希釈なし) 10(希釈なし) 100 1 000
10(希釈なし) 1(希釈なし) 1 1
例1. 表2の陽性管の例が1)のように，希釈倍数100で試験本数の一部が陽性となり，希釈倍数1 000
例4. 表2の陽性管の例が4)のように，希釈倍数1 000でも一部が陽性となっている場合は，希釈倍
7. 結果の表示 6.4で得られた硫酸塩還元菌数(MPN/100 ml)，附属書1で得られた硫酸塩還元菌数(個/ ml)
JIS K 0050 化学分析方法通則
JIS K 0101 工業用水試験方法
JIS K 0102 工場排水試験方法
JIS K 0211 分析化学用語（基礎部門）
JIS K 0550 超純水中の細菌数試験方法
JIS K 0557 用水・排水の試験に用いる水
JIS K 0950 プラスチック製滅菌シャーレ
JIS K 8061 亜硫酸ナトリウム（試薬）
JIS K 8102 エタノール(95)（試薬）
JIS K 8150 塩化ナトリウム（試薬）
JIS K 8180 塩酸（試薬）
JIS K 8263 寒天（試薬）
JIS K 8576 水酸化ナトリウム（試薬）
JIS K 8637 チオ硫酸ナトリウム五水和物（試薬）
JIS K 8978 硫酸鉄(Ⅱ)七水和物（試薬）
JIS K 8995 硫酸マグネシウム七水和物（試薬）
JIS K 9003 流動パラフィン（試薬）
JIS K 9007 りん酸二水素カリウム（試薬）
JIS R 3503 化学分析用ガラス器具
JIS R 3505 ガラス製体積計
JIS T 1702 ふ（孵）卵器
1. 改良ISA寒天培地による定量法 改良ISA寒天培地を用いて，三重層平板法によって試料中の硫酸塩
a) 試薬及び培地 試薬及び培地は，次による。
2) 希釈水 本体6.1 c)による。
3) 改良ISA寒天培地 本体6.1 d)に示す各試薬及びJIS K 8263に規定する寒天(粉末)15 gをそれぞれ
b) 器具及び装置 器具及び装置は，次による。
1) メスピペット 本体6.2 a)による。
2) ねじ口試験管 本体6.2 c)による。
3) 希釈瓶 本体6.2 d)による。
4) ペトリ皿 ガラス製の直径約90 mm，高さ約15 mmのもの。ペトリ皿滅菌箱に入れるか，アルミニ
ウムはく又は硫酸紙に包んで乾熱滅菌をしておく。又はJIS K 0950に規定するプラスチック製滅菌
5) 嫌気ジャー 内部の空気を，窒素，二酸化炭素などで置換して嫌気状態にできるもの又は残留する
6) 培養器 本体6.2 e)による。
7) 恒温槽 45±0.5 ℃に保てるもの。
c) 試料の希釈 硫酸塩還元菌の数が多い場合は，本体6.4.1による。
1) よく振り混ぜて均一にした本体5.の試料又はc)によって調製した希釈試料の一定量(0.3及び1 ml)
2) 約45 ℃の改良ISA寒天培地約10 mlを，それぞれのペトリ皿に注いだ後，直ちにふたをし，ペト
3) これらの平板に約45 ℃の改良ISA寒天培地約5 mlを更に注いだ後，直ちにふたをし，ペトリ皿を
4) 培地が固まったのを確認した後，嫌気ジャーに入れ，培養器に納め，30±1 ℃で4〜5 日間培養す
(4) 希釈していない試料1 mlで培養したペトリ皿でも集落数が10 個未満の場合は，その集落数を